摘要[目的]本研究旨在揭示ame-miR-14在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用.[方法]通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中的表达和序列真实性.饲喂ame-miR-14的模拟物(mimic-ame-miR-14)和抑制物(inhibitor-ame-miR-14)及其相应的阴性对照mimic-NC和inhibitor-NC对ame-miR-14分别进行过表达和敲降,利用RT-qPCR检测意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ame-miR-14的表达量.利用生物信息学软件预测ame-miR-14的靶基因并进行相关分析.利用RT-qPCR检测ame-miR-14 的过表达和敲降后其靶基因FoxO和Hedgehog在4-6日龄幼虫肠道中的相对表达量.[结果]ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中真实存在和表达.相较于饲喂mimic-NC,饲喂mimic-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中均为显著上调;相较于饲喂inhibitor-NC,饲喂inhibitor-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中皆为显著下调.ame-miR-14共靶向309个基因,可注释到45条KEGG通路和36个GO条目;进一步分析发现ame-miR-14可靶向14个生长发育相关基因,并与FoxO和Hedgehog之间存在潜在的靶向关系.过表达ame-miR-14后,相较于mimic-NC组,mimic-ame-miR-14组的4日龄幼虫肠道内FoxO表达量下调,5和6日龄幼虫肠道内FoxO表达量均为显著下调;敲降 ame-miR-14 后,相较于 inhibitor-NC 组,inhibitor-ame-miR-14 组 4 日龄幼虫肠道内 FoxO 表达量下调,5日龄幼虫肠道内FoxO表达量显著上调,6日龄幼虫肠道内FoxO表达量上调.与mimic-NC 组相比,过表达ame-miR-14后mimic-ame-miR-14组的Hedgehog表达量在4-6日龄幼虫肠道内皆显著下调;与 inhibitor-NC 组相比,敲降 ame-miR-14 后 inhibitor-ame-miR-14 组的 Hedgehog 表达量在4-6日 龄幼虫肠道内均为上调.[结论]ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在和表达;通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-14的有效过表达和敲降;ame-miR-14通过负调控FoxO和Hedgehog的表达潜在参与调节幼虫肠道发育.