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九香虫多糖提取条件筛选及其对人乳腺癌HCC1937细胞的抑制作用

Extraction conditions of polysaccharides from Aspongopus chinensis(Hemiptera:Dinidoridae)and their inhibitory effects on human breast cancer HCC1937 cells

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摘要[目的]推进中药九香虫Aspongopus chinensis开发与利用,探究九香虫多糖对人乳腺癌HCC1937细胞的作用效果.[方法]采用单因素实验和正交试验探究水提醇沉法提取九香虫多糖的最优条件,基于九香虫多糖提取率来确定最佳液料比、提取温度、提取时间和提取次数;CCK-8法检测0,2,4,6,8和10 mg/mL九香虫多糖作用后24和48 h时对人乳腺癌HCC1937细胞增殖的影响;0,4和8 mg/mL九香虫多糖处理HCC1937细胞,0,24和48 h时倒置显微镜下观察HCC1937细胞形态并于24和48 h时利用Hoechst 33258染色检测HCC1937细胞凋亡,24 h时利用流式细胞术检测HCC1937细胞的细胞周期并利用Western blot检测凋亡相关蛋白的表达.[结果]正交试验结果表明,九香虫多糖的最佳提取条件为:液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次,在上述条件下九香虫多糖提取率最高,为5.067％±0.071％.4,6,8和10 mg/mL九香虫多糖能够显著抑制HCC1937细胞增殖;8 mg/mL九香虫多糖阻滞HCC1937细胞的细胞周期于S期;4和8 mg/mL九香虫多糖促进HCC1937细胞凋亡,上调促凋亡蛋白CASPASE-3,CASPASE-8和BAX表达,下调抑凋亡蛋白BCL-2表达.[结论]采用水提醇沉法在最优提取条件下提取九香虫多糖的最高提取率为5.067％±0.071％,最优提取条件为:液料比40 mL/g、提取温度90℃、提取时间3 h和提取次数3次;九香虫多糖具有体外抑制人乳腺癌HCC1937细胞的活性,且可能是通过死亡受体通路和线粒通路引发细胞凋亡.