棉蚜热诱导型热激蛋白90基因响应棉酚与氟吡呋喃酮胁迫以及与转录因子HSF的相互影响
Response of heat inducible heat shock protein 90 gene of Aphis gossypii(Hemiptera:Aphididae)to gossypol and flupyradifurone stresses and mutual effect on transcription factor HSF
摘要[目的]本研究旨在鉴定棉蚜Aphis gossypii中热激蛋白(heat shock protein,Hsp)基因AgHsp90并明确AgHsp90对温度及植物次生物质和杀虫剂胁迫的响应.[方法]RT-PCR结合RACE克隆棉蚜AgHsp90并进行生物信息学分析;qRT-PCR检测AgHsp90在棉蚜不同发育阶段(1-4龄若虫和成虫)、不同温度(-5,0,5,10,15,20,30,35,38和42℃)处理1 h时成虫中以及植物次生物质(20 mg/L单宁酸、50 mg/L的棉酚、50 mg/L 2-十三烷酮和50 mg/L槲皮素)和杀虫剂氟吡呋喃酮[LC25(2.410 mg/L)]胁迫24 h时成虫中的表达量.通过饲喂法对棉蚜成虫AgHsp90和热激因子(heat shock factor,HSF)基因AgHSF进行RNAi,24 h时用饲喂法及浸叶法分别测定50 mg/L棉酚和LC40(4.649 mg/L)氟吡呋喃酮处理24和48 h时棉蚜成虫死亡率,探究AgHsp90对棉蚜对棉酚和氟吡呋喃酮敏感性的影响,初步证明AgHsp90与AgHSF的相互调控.[结果]获得 1 个棉蚜 Hsp90 基因 AgHsp90(GenBank 登录号:UOF38310),ORF 长 2 181 bp;AgHsp90 在棉蚜不同发育阶段间的表达量相对稳定,其中只有3龄若虫与成虫间的表达量存在显著差异.温度胁迫实验结果表明,AgHsp90可以被高温明显诱导,但低温使其表达量降低.分别与对照0.5 mol/L蔗糖和Triton X-100比较,棉蚜成虫中AgHsp90的表达量不被3种植物次生物质(棉酚、单宁酸和槲皮素)显著诱导,可以分别被2-十三烷酮和LC25氟吡呋喃酮显著诱导.与对照(饲喂dsGFP)比较,AgHsp90RNAi可明显增加棉酚和氟吡呋喃酮导致的棉蚜成虫死亡率;利用RNAi,AgHsp90与其转录因子AgHSF可相互影响彼此的表达量.[结论]棉蚜的热激蛋白基因AgHsp90能够被高温及氟吡呋喃酮显著诱导.AgHsp90很可能与棉蚜对棉酚及氟吡呋喃酮的敏感性相关.上述结果暗示AgHsp90在棉蚜应对高温及杀虫剂氟吡呋喃酮胁迫时发挥重要作用.
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