摘要[目的]miRNAs不仅调控昆虫的变态发育过程,在昆虫的生殖调控中也发挥重要作用.本研究旨在通过对家蚕Bombyx mori生殖调控相关miRNA(Bmo-miR-2763)的靶基因进行鉴定和表达分析,揭示miRNA在家蚕精巢和卵巢发育调控中的潜在分子机制.[方法]利用生物信息学方法预测Bmo-miR-2763的靶基因;利用qRT-PCR检测每头家蚕5龄幼虫血淋巴中注射5 μg 20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)后 2,6,12 和 24 h 时 Bmo-miR-2763 及其预测靶基因BmGRF在脂肪体中的表达量;并利用qRT-PCR检测Bmo-miR-2763及其预测靶基因BmGRF在20E处理24 h时5龄幼虫不同组织(血淋巴、表皮、中肠、头、脂肪体、丝腺、马氏管、精巢和卵巢)以及未处理的正常家蚕4-5龄幼虫、蛹和成虫中的表达量;双荧光酶报告载体系统分析Bmo-miR-2763与其预测靶基因BmGRF的互作.[结果]与对照组相比,20E处理后家蚕5龄幼虫脂肪体中Bmo-miR-2763的表达量显著升高;Bmo-miR-2763的预测靶基因BmGRF也显著上调.Bmo-miR-2763和BmGRF在20E处理后24 h时家蚕5龄幼虫精巢和卵巢中都有较高表达量,且二者在精巢中的表达趋势一致,在卵巢中表达趋势相反;BmGRF在未处理正常家蚕不同发育阶段的表达量变化与Bmo-miR-2763 的表达量呈负相关.双荧光素酶活性检测结果显示,Bmo-miR-2763模拟物和BmGRF 3'UTR过表达载体共转染时,荧光素酶活性下降56％,表明Bmo-miR-2763可与靶基因BmGRF3'UTR区的互作抑制其在翻译水平的表达.[结论]20E可诱导家蚕Bmo-miR-2763的表达,Bmo-miR-2763可通过调控靶基因BmGRF参与家蚕卵巢的发育调控.