家蚕幼虫体内抗氧化活性物质成分筛选及非靶向代谢组学分析
Screening of antioxidant active components from the larval bodies of Bombyx mori and analysis of non-targeted metabolomics
摘要[目的]分析家蚕Bombyx mori幼虫体内天然主效抗氧化成分的类别、作用效果和单体组成,为其开发利用以及药效作用的研究提供参考.[方法]以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]和 2,2-二苯基-2-三硝基苯肼(2,2-diphenyl-l-picrylhydrazyl,DPPH)自由基的清除能力测定3个桑树品种(禾叶白、冀桑2号和桲椤)叶以及取食冀桑2号叶片的4个家蚕品种(菁松×皓月、东肥、彩3和彩4)5龄幼虫蚕砂和全蚕体的提取液的抗氧化能力(antioxidant capacity,AC);采用分光光度法和反相高效液相色谱-紫外检测法(reverse-phase high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection,RP-HPLC-UV)测定全部提取液的总黄酮、总酚、多糖和1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,1-DNJ)的含量,分析幼虫全蚕体的主效抗氧化活性物质;检测6个家蚕品种(东肥、安四无花、彩甘、7903、彩0和彩3)末龄(3眠蚕的4龄,4眠蚕的5龄)幼虫每日血淋巴中的总酚含量和清除ABTS自由基的AC(ACABTs);采用液相色谱-质谱联用技术(liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS)对 4 个家蚕品种(菁松×皓月、东肥、彩3和彩4)5龄最后1 d幼虫全蚕体和冀桑2号叶片抗氧化活性物质成分进行非靶向定性和定量解析.[结果]桑叶提取液的总黄酮、总酚和多糖含量与提取液的AC呈现极显著正相关,5龄幼虫蚕砂和全蚕体提取液中总黄酮和总酚含量与其提取液的AC呈极显著正相关.4个家蚕品种5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液的ACABTS[(22.61±1.37)~(36.70±2.12)mg VC/g]和 ACDPPH[(16.77±0.47)~(23.43±2.34)mg VC/g]分别是冀桑 2 号叶片提取液的1.46~2.38和1.81~2.54倍,也分别是5龄最后1 d幼虫蚕砂提取液的0.96~2.27和1.23~7.73倍,5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液的总酚含量[(9.14±0.13)~(13.28±0.78)mg/g]与冀桑2号叶提取液的[(19.74±0.58)mg/g]和5龄最后1 d幼虫蚕砂的[(10.19±0.19)~(16.74±0.24)mg/g]接近,而5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液中总黄酮和1-DNJ的含量显著低于冀桑2号叶和5龄最后1 d幼虫蚕砂提取液中的,上述数据显示总酚是5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液中起抗氧化作用的主要成分.6个家蚕品种末龄幼虫每日血淋巴ACABTS值和总酚含量呈极显著正相关,进一步证实总酚是蚕体的重要抗氧化成分.在4个家蚕品种5龄最后1 d幼虫全蚕体和冀桑2号叶片中共鉴定到436个代谢物,相关性和主成分分析(principal component analysis,PCA)显示436个代谢物含量差异能够有效区分桑叶和全蚕体、彩4和其他3种家蚕的全蚕体,375个差异代谢物聚类分析结果显示5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液中含量高于冀桑2号叶的单体物质主要属于苯及其衍生物,有机酸、有机氧和有机氮化合物,特定的酚类和氨基酸的单体组成是5龄最后1 d幼虫全蚕体提取液AC高于摄入冀桑2号叶提取液的主要原因.[结论]本研究证实家蚕5龄最后1 d幼虫全蚕体抗氧化能力高于冀桑2号叶片和蚕砂,酚类是家蚕的主要天然抗氧化剂,家蚕对摄食桑叶物质选择性吸收和转化形成其特有的抗氧化物质组份,解毒酶基因的序列多态和表达模式变化是导致家蚕体品种间酚类组成差异的重要原因,这些发现为家蚕体天然抗氧化物质的应用和开发提供了科学依据.
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