家蚕马氏管特异表达基因BmPiT4175启动子的克隆及活性分析
Cloning and activity analysis of the promoter of Malpighian tubule-specifically expressed gene BmPiT4175 of Bombyx mori
摘要[目的]鉴定家蚕Bombyx mori马氏管特异表达基因及其启动子,为家蚕的代谢排泄、解毒及免疫相关基因功能的研究及利用提供新的工具与支撑.[方法]基于家蚕全组织蛋白质组学数据进行马氏管特异表达基因筛选并利用RT-PCR验证基因在家蚕5龄幼虫头、表皮、中肠、脂肪体、马氏管、丝腺、精巢、卵巢、血细胞及气管中的表达;利用qRT-PCR检测家蚕不同发育阶段(卵、3龄眠、4龄幼虫、5龄幼虫、上簇期、蛹和成虫)马氏管中及5龄幼虫头、表皮、中肠、脂肪体、马氏管、丝腺、精巢、卵巢、血细胞和气管中上述特异表达基因的表达量;利用PCR克隆家蚕马氏管特异表达基因BmPiT4175的上游启动子序列,并构建以EGFP为报告基因的转基因载体,获得转基因家蚕,在个体水平验证BmPiT4175上游启动子的活性及组织特异性.[结果]筛选获得了在家蚕马氏管特异表达的基因BmPiT4175;所克隆的BmPiT4175启动子长2 955 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕马氏管中特异表达,且EGFP与内源基因BmPiT4175的表达量相当.[结论]BmPiT4175的表达模式及其启动子活性都是家蚕马氏管特异的.
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