地熊蜂抗菌免疫相关内参基因的筛选与稳定性评估
Screening and stability evaluation of reference genes related to antibacterial immunity in Bombus terrestris(Hymenoptera:Apidae)
摘要[目的]筛选用于定量地熊蜂Bombus terrestris抗菌免疫基因表达量变化的稳定内参基因.[方法]以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和大肠杆菌Escherichia coli侵染的地熊蜂成年工蜂和雄蜂肠道和脂肪体为对象,采用RT-qPCR技术,检测候选内参基因EF-1,EF-1α,GAPDH1,GAPDH2,S5,S18,S28,TUB,Argk 和 RP49 的表达量;采用 GeNorm,NormFinder 和 BestKeeper 对上述候选内参基因的表达稳定性进行分析;使用RefFinder综合分析筛选合适的内参基因.[结果]地熊蜂成年工蜂前肠中表达最稳定的内参基因是GAPDH1和GAPDH2,适合成年工蜂中肠的内参基因为RP49和GAPDH2,适合成年工蜂后肠的内参基因的是EF-1和GAPDH2,适合成年工蜂脂肪体的内参基因是EF-1和S5.S18和GAPDH2为地熊蜂成年雄蜂前肠的理想内参基因,S5和EF-1为成年雄蜂中肠和脂肪体的理想内参基因,GAPDH2和S5为成年雄蜂后肠的理想内参基因.[结论]细菌的侵染可显著改变地熊蜂不同组织中部分内参基因的表达量,导致部分内参基因在不同免疫组织中表达不稳定.本研究结果对地熊蜂免疫应答及工蜂和雄蜂肠道与脂肪体的基因表达变化研究具有重要意义,为熊蜂抗菌免疫相关基因表达量研究奠定了基础.
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