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西方蜜蜂ATG5基因的克隆、分析及时空表达谱测定

Cloning,analysis,and expression,of the Apis mellifera ATG5 gene

摘要[目的]对西方蜜蜂Apis mellifera自噬相关基因5(Autophagy related gene 5,AmATG5)进行分子克隆和生物信息学分析,并检测AmATG5在工蜂7个组织和7个发育时间的表达谱,为进一步探究AmATG5的功能提供详实的参考依据.[方法]通过PCR扩增AmATG5的编码序列(Coding sequence,CDS)并进行Sanger测序验证.使用相关软件预测和分析AmATG5蛋白的理化性质、分子特征、保守基序、高级结构和蛋白互作网络.通过核质分离与RT-qPCR验证AmATG5的亚细胞定位.采用RT-qPCR检测AmATG5的相对表达水平.[结果]成功克隆到AmATG5的CDS;AmATG5含265个氨基酸,相对分子量约为31.41 kD,分子式为C1428H2168N372O403S13,含31个磷酸化位点和7个保守基序,不含跨膜结构域和信号肽;AmATG5 mRNA主要分布于细胞质;AmATG5与小蜜蜂Apis florea的ATG5在进化树上聚为一支;AmATG5包含110个无规则卷曲,93个α-螺旋,48条延伸链和14个β-转角;AmATG5与自噬相关蛋白1和自噬相关蛋白6等9个蛋白构成1个互作网络;AmATG5在工蜂的毒腺、中肠、咽下腺、脂肪体、脑、触角和表皮7个组织中差异表达,在脑中的表达量最高,而在表皮中的表达量最低;AmATG5的表达量在卵、1、3和5日龄幼虫阶段持续下降,在8日龄预蛹、11和16日龄蛹阶段持续上升,至16日龄蛹时达到最高.[结论]AmATG5为疏水性蛋白和胞内蛋白,通过与ATG6等9个蛋白潜在互作发挥作用;AmATG5在西方蜜蜂工蜂的不同组织和不同发育阶段动态差异表达,在脑和16日龄蛹中特异性高表达.

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应用昆虫学报

应用昆虫学报

2025年62卷2期

371-380页

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