下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

Metabolomics of Siha Supernatant in Cervical Cancer Cells with Down-regulated HPV16 E6/E7 Expression

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摘要目的基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7 表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16 宫颈癌发生的关键代谢标志物.方法通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7 表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6 组与si-E7 组,并验证其转染效率.利用1H NMR 代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7 表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0 在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径.结果荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6 组与si-E7 组中E6/E7 的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7 表达后,检测 13 种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0 在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等 10 条代谢途径.结论 HPV16 感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据.