恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

Culture of Malignant Pleural Mesothelioma Cells and the Effects of CDKN2B on Cancer Cell

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摘要目的探讨不同培养条件(RPMI-1640、DMEM和 DMEM/F12 培养液)对人恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用.方法从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12 培养液培养.CCK-8 检测细胞增殖,细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察,免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1 荧光强度.RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力.Transwell检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果建立的MPM细胞在RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12 培养液中传至第 10 代仍具有较好的活力,且MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1 在细胞中均表达,MPM细胞在RPMI-1640 培养液中活力较为稳定.CDKN2B在MPM细胞中低表达(P<0.05),过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.05)和上皮间质转化(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01).结论建立的MPM细胞可在RPMI-1640 培养液中稳定传代,CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标.