丙泊酚调节MPP+诱导的SH-SY5Y细胞线粒体氧化应激和凋亡
Propofol Regulates MPP+-induced Mitochondrial Oxidative Stress and Apoptosis in SH-SY5Y Cells
摘要目的 探讨不同浓度的丙泊酚(propofol,PPF)对 1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-Methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的帕金森(Parkinson's disease,PD)模型细胞氧化应激和凋亡的作用.方法 利用1 mM MPP+诱导人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y构建PD细胞模型.PPF处理组分别用 10、20、40、80 μM PPF在MPP+诱导前刺激SH-SY5Y细胞4 h.细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)评估细胞增殖活力.2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(H2DCF-DA)荧光探针用于检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS).试剂盒分别检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NADPH)氧化酶的水平.Western blot用于检测线粒体和细胞质中细胞色素c的蛋白表达以及细胞中Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3 蛋白表达.流式细胞术分析细胞凋亡率.结果 MPP+诱导明显抑制SH-SY5Y细胞的增殖(P<0.001),促进细胞中ROS(P<0.001)、MDA(P<0.001)、NADPH氧化酶(P<0.01)、细胞质中细胞色素c的表达(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.001)以及促凋亡蛋白Bax和Cleaved caspase-3的表达(P<0.01),减少线粒体中细胞色素c的蛋白表达(P<0.01)和抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达(P<0.01).PPF预处理可缓解MPP+诱导引起的SH-SY5Y细胞增殖抑制以及氧化应激和凋亡的促进作用(P<0.001),且40 μM和80 μM对细胞的作用更为显著.结论 PPF预处理可缓解MMP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激,减少细胞凋亡.
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