换一批
换一批小鼠ERα基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其表达鉴定
Construction and Identification of Lentiviral Vector-mediated RNA Interference of Mouse ERα Gene
摘要目的：利用慢病毒载体介导小鼠颏舌肌成肌细胞ERα基因沉默，筛选鉴定后建立ERα基因稳定下调的细胞群。方法：设计合成4组针对小鼠ERα基因的shRNA序列（ERα-321、ERα-693、ERα-978、ERα-1297）及1组阴性对照序列(shNC)，连接到经双酶切处理过的pGLV3/H1/GFP载体上，转染293T细胞包装产生慢病毒。用慢病毒转染体外培养的小鼠颏舌肌成肌细胞，流式细胞仪筛选后提取细胞RNA，RT-PCR法鉴定各组细胞中ERα的RNA干扰效果。结果：细胞转染5种慢病毒后荧光率分别为21.4%、25.1%、30.7%、23.6%和56.4%，经流式细胞仪无菌分选后荧光率接近100%。与阴性对照组相比，4组细胞的ERαmRNA表达均显著降低（P＜0.05），其中ERα-978组的干扰效率最高，为82.7%。结论：本实验成功筛选并建立了ERα基因稳定下调的成肌细胞群，为研究ERα下游信号通路奠定了重要基础。
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