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不同浓度的大黄素对人乳牙牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

Effect of emodin at different concentrations on proliferation and osteogenic differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth

摘要目的:研究大黄素对人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化的影响.方法:分离人乳牙牙髓干细胞,镜下观察细胞形态,成骨诱导后经茜素红染色和碱性磷酸酶染色鉴定其成骨分化能力,流式细胞术检测细胞表面标记物鉴定其干细胞源性.不同浓度的大黄素预处理人乳牙牙髓干细胞,通过CCK-8法检测细胞的增殖能力,茜素红染色、碱性磷酸酶染色检测细胞成骨分化能力,通过RT-qPCR检测碱性磷酸酶、RUNX2和骨钙素的mRNA表达,Western blot检测成骨相关蛋白RUNX2的蛋白表达.结果:①CCK-8结果显示,大黄素在浓度为0.1-10 μmol/L时可以明显促进人乳牙牙髓干细胞的增殖,而浓度为100 μmol/L则显著抑制了细胞的增殖;②碱性磷酸酶染色和茜素红染色显示,随着大黄素浓度的升高,碱性磷酸酶染色和茜素红染色逐渐加深,10μmol/L大黄素处理组碱性磷酸酶染色最深,矿化结节数量也最多;③RT-qPCR结果显示,大黄素促进碱性磷酸酶、RUNX2和骨钙素mRNA的表达量(P<0.05).④Western blot结果显示,成骨相关蛋白RUNX2的表达随着大黄素的处理浓度增加而增加.结论:大黄素在1-10μmol/L范围内对人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化具有促进作用,且浓度为10μmol/L时效果最明显.

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