换一批白念珠菌RAS1基因高表达菌株的构建及鉴定
Construction and identification of RAS1-overexpression strain of Candida albicans
摘要目的：构建白念珠菌RAS1基因高表达菌株pCaEXP?RAS1?CAI4。方法：将白念珠菌RAS1基因的开放阅读框（ ORF）置于高表达载体pCaEXP的启动子MET3之后，构建高表达质粒载体pCaEXP?RAS1。将整合的重组质粒转化进入大肠杆菌DH5α，经扩增后采用质粒抽提试剂盒大量制备pCaEXP?RAS1质粒。单酶切线性化质粒，将线性化的pCaEXP?RAS1经醋酸锂法转化入白念珠菌CAI4细胞内，随后在SD?ura?met?cys选择性培养基获得转化子，构建pCaEXP?RAS1?CAI4菌株。挑取单克隆菌落，经菌落PCR验证阳性转化子，并采用实时定量PCR检验RAS1基因在pCaEXP?RAS1?CAI4菌株的表达水平。结果：酶切及测序鉴定表明高表达质粒载体pCaEXP?RAS1构建成功，实时定量PCR检验转化子RAS1基因在pCaEXP?RAS1?CAI4菌株的表达水平，表明pCaEXP?RAS1?CAI4菌株构建成功。结论：通过高表达质粒载体pCaEXP?RAS1可以成功构建pCaEXP?RAS1?CAI4菌株。
更多相关知识
分类号
R780.2（口腔病理学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1674-8603.2016.02.004
发布时间
2016-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览130
- 被引5
- 下载5
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
