换一批变形链球菌表面蛋白PAc的原核表达及纯化
Prokaryotic Expression and Purification of Streptococcus Mutans Surface Protein(PAc).
摘要目的:对在大肠杆菌中表达重组变形链球菌表面蛋白抗原PAc的培养条件进行优化,制备高纯度重组蛋白rPAc.方法:载体构建原核表达载体pET20b(+)-AP对不同培养基、诱导浓度,温度和时间等进行筛选确定最佳条件,采用亲和层析分离纯化rPAc蛋白.结果:含原核表达载体pET20b(+)-AP的大肠杆菌在LB培养基中培养至A600=0.6时,终浓度为1 mM的IPTG诱导,30 ℃继续振荡培养4 h,可使rPAc的表达量达到最大.分离纯化的蛋白在SDS-PAGE中显示为单一条带.结论:对PAc A-P区的重组质粒pET20b(+)-AP表达的rPAc经纯化后可用于动物免疫,为探索防龋DNA疫苗pCIA-P的新型免疫策略奠定必要的物质基础.
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