换一批
换一批HAb18G/CD147真核荧光蛋白的表达及鉴定
The Construction and Expression of Eukaryotic EGFP Expression Vector Containing Hepatoma Assosciated Antigen HAb18G/CD147
摘要构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22-50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用.通过PCR及Overlapping PCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体.并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确.用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能.成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能.结果显示HAb18G/CD147基因第22-50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系.实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础.
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