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首页 > 科学技术与工程 > 截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

Expression, Purification and Indentification of the Truncated HCV NS5B RNA Polymerase in the E. coli

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摘要为构建HCV截短型ns5b△21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体.运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5b△21基因;克隆入原核表达载体pRSETA.将重组表达质粒pRSETA-ns5b△21转化B121大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5b△21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清.说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体.

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作者 田江红 [1] 雷迎峰 [1] 尹文 [1] 陈任安 [1] 汪桦 [1] 吕欣 [1] 杨敬 [1] 孙梦宁 [1] 姚敏 [1] 徐志凯 [1] 学术成果认领
作者单位 第四军医大学基础部微生物学教研室,西安,710032 [1]
关键词 HCVNS5B RNA聚合酶大肠杆菌蛋白表达
分类号 Q343.17（遗传学分支学科）
栏目名称
论文
DOI 10.3969/j.issn.1671-1815.2010.04.004
发布时间 2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30600564） 国家自然科学基金（30670100） 国家自然科学基金（30700710） 国家自然科学基金（3070030）
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科学技术与工程

科学技术与工程

2010年10卷4期

863-867页

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