重组2型腺相关病毒介导锰超氧化物歧化酶高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的保护作用

The recombinant adeno-associated viruses of the serotypes 2 mediated overexpression of MnSOD protects against oxidation-induced apoptosis in stria marginal cells of rat cochlea

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摘要目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制.方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组.实验组按感染复数(MOI)为104v·g/cell感染rAAV2- MnSOD-EGFP,同时感染rAAV2-EGFP作对照组及不作处理缘细胞为正常组.荧光显微镜下观察MCs绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况及免疫印迹法(western blot)分析转染后MnSOD的表达水平.实验组及对照组同时暴露于400 μmol/L H2O2 2 h,24 h后比色法测定各组丙二醛(MDA )含量;流式细胞PI荧光标记检测细胞凋亡率;Western blot 检测凋亡因子Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达.结果:①各组MCs感染病毒后,生长正常,实验组感染rAAV2- MnSOD-EGFP后4d出现EGFP的表达,10 d至高峰;且持续细胞体外生长的整个周期.实验组MnSOD的表达及活性明显高与对照组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05).②经H2O2作用后实验组MDA、Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达及凋亡率明显低与对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:rAAV2-MnSOD-EGFP能有效地转染体外培养的MCs使其高表达MnSOD,并对MCs氧化损伤有保护作用,这种保护作用与抑制凋亡因子Caspase-3的活化有关.