PKCβ/p66Shc氧化应激通路介导高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡的作用

The role of PKCβ/p66Shc oxidative stress signaling pathway in hyperoxia induced apoptosis in alveolar epithelial cell A549

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摘要目的：探讨PKCβ/p66Shc氧化应激通路介导高氧诱导人A549肺泡上皮细胞凋亡的作用。方法在体外培养人A549肺泡上皮细胞，随机分为对照组（仍置于含5%CO2培养箱中）、高氧组（通入3 L/min的900 ml/L O2和50 ml/L CO2高纯混合气，10 min后密闭培养）、LY333531组（用终浓度为10μmol/L的等量PKCβ特异性抑制剂LY333531培养液预处理24 h后，用高氧诱导A549细胞，10 min后密闭培养）。倒置相差显微镜观察12、24、48 h后细胞形态变化，流式细胞仪检测24 h后细胞凋亡率，细胞免疫化学检测24 h后细胞中PKCβ/Pin1/p66Shc/p66Shc-Ser36蛋白的表达。结果与对照组相比，高氧组细胞形态变圆，间隙加大，活细胞数量明显降低，悬浮细胞明显增多；LY333531组活细胞数量较高氧组增多，悬浮细胞数减少，但是未达到对照组的水平。高氧组与对照组相比，细胞凋亡率明显增加，LY333531组的凋亡率低于高氧组，差异均有统计学意义（P<0.01）。与对照组相比，高氧组24 h后A549细胞内PKCβ/Pin1/p66Shc/p66Shc-Ser36蛋白表达均明显增加，LY333531组的表达低于高氧组，差异均有统计学意义（P<0.01）。结论高氧能诱导肺泡上皮细胞内PKCβ表达增多， LY333531则能抑制PKCβ蛋白的表达，进而减少Pin1、p66Shc、p66Shc-Ser36蛋白表达，从而减少A549细胞凋亡而减轻高氧诱导的人肺泡上皮细胞的损伤。