换一批核定位信号突变型P21真核表达载体的构建及其对HepG2.2.15细胞病毒复制的影响
Construction of eukaryotic expression vector of P21 mutation type by nuclear location signal and its effect on virus replication in HepG2.2.15 Cells
摘要目的 构建核定位信号突变型P21基因的真核表达载体并初步探讨其对HBV复制的影响.方法 采用基因定点诱变技术突变P21基因的核定位信号序列,采用DNA重组技术,亚克隆突变型P21基因至pDsRed1-c1真核表达载体中,重组为pDsRed1-C1-p21NLS-,酶切鉴定及DNA测序,脂质体转染HepG2.2.15细胞,RTPCR检测目的 基因pDsRed1-C1-p21NLS-的表达,荧光显微镜观测目的 基因亚细胞定位,ELBA法检测培养上清液中HBsAg、HBeAg的水平.结果 pDsRed1-C1-p21NLS-质粒构建成功,与野生型相比,主要在胞浆表达,促进病毒的复制.二者差异有统计学意义(P<0.01).结论 P21的亚细胞定位,对HepG2.2.15细胞中病毒复制的影响具有明显差异.胞核P21抑制病毒的复制,而胞浆P21促进病毒复制.
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