利用半肝切除再生模型研究单个肝细胞核内耐药鸭乙型肝炎病毒DNA的动态变化
Dynamic changes in drug-resistant duck hepatitis B virus DNA in single hepatocyte nucleus after hemihepatectomy using a liver regeneration model
摘要目的 利用半肝切除再生模型研究单个肝细胞核内耐药鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA的动态变化规律.方法 45日龄慢性DHBV感染鸭半肝切除后接种突变株转染上清,持续饲喂拉米夫定,定期采血及取肝组织标本,检测外周血病毒DNA水平及病毒株,流式细胞仪分选单个肝细胞核及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性与阴性细胞核,巢式PCR扩增核内DHBV YMDD区,直接测序法检测是否存在突变.计数资料组间比较采用x2检验和Fisher精确概率法.半肝切除前后PCNA的比较使用方差分析Welch法.结果 半肝切除前单个核内病毒DNA及血清中克隆均为野生株;接种突变株转染上清后,在半肝切除术后1周时突变株感染的肝细胞核比率高于术后12周时的水平(x2=7.225,P<0.01);术前PCNA阳性肝细胞核比率为(0.84±0.36)%,术后1周时显著升至(42.26±6.48)%,术后12周时为(11.83±3.97)%,各时间点比较差异有统计学意义(F=190.832,P<0.001);术后1周时突变株感染的PCNA阳性细胞核比率高于术后12周时的水平,两组比较差异有统计学意义(x2=7.063,P<0.01),而术后PCNA阴性的细胞核突变株感染的比率极低.结论 半肝切除可为耐药病毒提供复制空间,但耐药病毒在外周血及肝内未能形成优势毒株.
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