换一批基于微阵列数据的circRNA-miRNA-mRNA竞争性内源RNA网络构建及其与自身免疫性肝炎小鼠模型肝损伤的相关性分析
Construction of a circRNA-miRNA-mRNA competitive endogenous RNA network based on microarray data and its correlation with liver injury in a mouse model of autoimmune hepatitis
摘要目的 构建环状RNA(circRNA)-微小RNA(miRNA)-信使RNA(mRNA)竞争性内源RNA(ceRNA)网络,探讨其在刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型中的潜在调控机制,并验证关键基因的表达与肝损伤的关系.方法 使用高通量数据筛选差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,基于Pearson相关分析和Miranda程序预测miRNA与mRNA及circRNA的配对关系,构建ceRNA网络.对网络中的差异表达基因进行GO和KEGG富集分析.选取SPF级雄性C57BL/6小鼠12只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只,模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A构建AIH小鼠模型,对照组注射生理盐水.通过qRT-PCR和Western Blot方法验证circ_0001577、miR-7055-3p和Akt3的表达.测定血清转氨酶(ALT、AST)和肝组织中丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,并分析其与基因表达的相关性.计量资料两组间比较采用成组t检验.使用Spearman相关分析法分析基因表达与肝损伤指标之间的相关性.结果 构建了包含5 795个circRNA-miRNA-mRNA配对的ceRNA网络,发现circ_0001577为中心基因.与对照组小鼠比较,模型组中的circ_0001577和Akt3表达上调,miR-7055-3p下调,差异均有统计学意义(P值均<0.05),且circ_0001577与Akt3呈正相关(r=0.861,P<0.001),miR-7055-3p与两者呈负相关(r值分别为-0.644、-0.855,P值均<0.05).模型组小鼠肝脏Akt3蛋白表达显著高于对照组(1.04±0.10 vs 0.72±0.06,t=-6.49,P=0.001),并与circ_0001577呈正相关(r=0.579,P=0.048),与miR-7055-3p呈负相关(r=-0.891,P<0.001).模型组小鼠血清ALT、AST和肝组织MDA、NO含量较对照组均显著增加(P值均<0.05),上述肝损伤指标与circ_0001577、Akt3呈正相关(r值分别为0.849、0.865、0.811、0.801;0.889、0.954、0.938、0.961,P值均<0.05),与miR-7055-3p呈负相关(r值分别为-0.687、-0.818、-0.833、-0.870,P值均<0.05),且与Akt蛋白表达呈正相关(r值分别为0.648、0.796、0.848、0.860,P值均<0.05).结论 circ_0001577通过竞争性吸附miR-7055-3p,导致Akt3抑制被解除,进而促进Akt3的表达,参与AIH的发生发展.circ_0001577及其相关通路可能成为AIH的潜在治疗靶点.
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