液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

Determination of oestrone and estradiol in serum based on liquid chromatography-tandem mass spectrometry

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摘要目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测.方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析.用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05％甲酸)-水(0.05％甲酸),流速为0.3 mL/min.用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据“生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)”对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价.用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间.结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05～10 nmol/L范围内线性关系良好.该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15％,稳定性良好.初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律.结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法.