换一批液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测结核分枝杆菌耐多药突变
Detection of multidrug-resistant Mycobacterium Tuberculosis by suspension array technology and allele-specific primer extension reaction
摘要目的 建立一种耐多药结核分枝杆菌检测方法.方法 设计并构建含有katG315、rpoB526、rpoB531耐药基因突变位点的质粒;通过PCR扩增及纯化、等位基因特异性引物延伸反应(ASPE)、荧光微球杂交反应及液相芯片系统Luminex 200检测;并对该方法反应条件进行探索及方法学评价.结果 ASPE反应中Tsp DNA聚合酶最适浓度为0.025U/μL,杂交荧光微球浓度为每μL 100个,链霉亲和素藻红蛋白浓度及杂交时间分别为2μg/mL和20 min;所建立方法的检测灵敏度最低可达1ng/mL;当质粒浓度为1.5×105 ng/mL时,批间和批内变异系数(CV)分别为6.48％～12.15％和0.35％ ～6.92％;当质粒浓度为2 ng/mL时,批间和批内变异系数(CV)分别为5.73％ ～ 10.77％和0.97％ ～ 8.91％;特异性引物探针与其他突变位点均无交叉反应.结论 液相芯片技术联合等位基因特异性引物延伸反应检测耐多药结核分枝杆菌灵敏且具有成本低、高通量等特点,极具临床应用潜力.
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关键词
液相芯片技术等位基因特异性引物延伸反应结核分枝杆菌耐多药性suspension array technologyallele-specific primer extension reactionMycobacterium Tuberculosismultidrug resistance
医学主题词
敏感性与特异性(Sensitivity and Specificity)等位基因(Alleles)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)突变(Mutation)方法(Methods)
分类号
R446.5（诊断学）
栏目名称
DOI
10.13602/j.cnki.jcls.2016.03.02
发布时间
2016-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划（20130102086JC）
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