血小板表面C1s蛋白表达检测方法的建立及初步应用
Development of a method for measuring complement C1s protein on platelet surface and its preliminary application
摘要目的 建立血小板表面C1s蛋白的流式细胞术检测方法,并初步探讨其在原发免疫性血小板减少症(ITP)辅助诊断中的潜在应用价值.方法 以C1s蛋白偶联2 μm羧基化磁珠制备C1s磁珠,并将C1s磁珠作为质控品,采用(FITC)标记的C1s抗体作为检测抗体,建立血小板表面C1s蛋白表达的流式细胞术检测方法,并评价该方法的分析内、分析间精密度和线性;比较ITP组、非ITP血小板减少组与健康对照组血小板表面C1s蛋白表达水平.结果 光镜观察显示,未偶联C1s蛋白的羧基化磁珠(空白磁珠)与C1s磁珠两者分散均一,无聚团现象.荧光显微镜下可见C1s磁珠呈现明显黄绿色荧光,而空白磁珠无荧光信号.所建立的流式检测方法精密度良好,低、中、高浓度C1s磁珠的分析内变异系数(CV)值分别为7.02%、7.12%、3.91%;分析间CV值分别为13.49%、6.15%、0.78%.线性良好,决定系数(R2)=0.998 8.临床样本血小板表面C1s检测结果显示,ITP组C1s阳性血小板的比例(2.56±0.79)%显著高于健康对照组(0.23±0.18)%和非ITP血小板减少疾病对照组(0.22±0.10)%,差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 成功建立了一种稳定可靠的血小板表面C1s蛋白流式细胞术检测方法,初步证实ITP患者血小板表面C1s表达显著升高,提示其可能作为ITP潜在的辅助诊断标志物.
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