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肠神经胶质细胞源性神经营养因子对肠T淋巴细胞的影响及其在葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠结肠炎中的作用

Effect of enteric glial cell line derived neurotrophic factor on intestinal T lymphocytes and its role in dextran sodium induced colitis in mice

摘要目的 探讨肠神经胶质细胞(EGCs)源性神经营养因子(GDNF)对肠T淋巴细胞(简称T细胞)的影响及其在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎中的作用.方法 取4只C57BL/6小鼠提取脾脏原代T细胞,将其与EGCs随机分为T细胞1组、T+EGCs组及T+EGCs+anti-GDNF组,行Transwell共培养.采用蛋白质印迹法(Western Blot)及免疫荧光检测GDNF受体(GFR-α1/RET),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-10的表达,流式细胞术检测Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+Treg)比例.再取脾脏T细胞及EGCs并将其随机分为T细胞2组与T+GDNF组,检测IL-10的表达及Foxp3+Treg比例.另取18只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、DSS组及DSS+GDNF组,每组6只.对照组连续7日饮用无菌水,其余两组连续7日饮用2.5%DSS,DSS+GDNF组再连续7日腹腔注射GDNF 5μg/kg.对所有小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分及HE染色后组织学评分,采用流式细胞术检测小鼠肠系膜淋巴结Foxp3+Treg比例,ELISA检测结肠组织中IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 C57BL/6小鼠脾脏原代T细胞中存在GFR-α1/RET.T+EGCs组Foxp3+Treg比例及IL-10水平均高于其余两组(P<0.05).T+GDNF组Foxp3+Treg比例及IL-10水平均高于T细胞2组(P<0.05).DSS组小鼠DAI、组织学评分及TNF-α水平均高于对照组,IL-10水平低于对照组(P<0.05).DSS+GDNF组小鼠DAI、组织学评分及TNF-α水平均低于DSS组,IL-10水平及Foxp3+Treg比例均高于DSS组(P<0.05).DSS+GDNF组的IL-10、TNF-α水平及Foxp3+Treg比例均高于对照组(P<0.05).结论 GDNF可通过诱导T细胞向Foxp3+Treg分化来间接调节肠道免疫反应、减轻肠道炎症.

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