换一批核转录因子红细胞系相关因子-2干扰质粒构建及鉴定
Construction and identification of nuclear factor erythroid-2-related factor 2 gene RNA interference recombinant plasmid
摘要目的 设计及构建小鼠核转录因子红细胞系相关因子-2(Nrf2)基因的干扰质粒,并筛选出效果最好的干扰质粒.方法 设计3组针对Nrf2基因的核糖核酸干扰(RNAi)序列,应用基因重组技术克隆入载体中构建短发夹RNA(shRNA),分别为shRNA1、shRNA2及shRNA3,通过基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至BV2细胞,实时PCR检测Nrf2 mRNA的表达,Western Blot法检测Nrf2蛋白的表达.结果 测序表明,克隆入载体中的Nrf2干扰序列及读码框完全正确,实时PCR及Western Blot显示shRNA3干扰效果最强.结论 成功构建小鼠Nrf2的有效干扰质粒,为Nrf2信号通路在脑卒中领域的功能研究奠定了基础.
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分类号
R363（病理学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-1648.2017.02.014
发布时间
2017-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省科技厅自然科学基金面上项目（(BK20141121)）
无锡市卫生局青年基金（(Q201301,Q201625)）
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