摘要目的 探究甲基转移酶样蛋白3(methyltransferase-like 3,METTL3)通过m6A修饰调控整合素β3(ITGB3)表达促进巨核细胞分化的分子机制.方法 本研究以人成巨核细胞白血病细胞系(MEG-01)为模型,结合20 nM佛波酯(phorbol myristate acetate,PM A)诱导分化体系.首先,通过蛋白质免疫印迹(western blot,WB)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测METTL3在MEG-01细胞中的表达.其次,利用慢病毒介导的shRNA(shMETTL3)构建METTL3敲低的MEG-01巨核细胞系.WB和RT-qPCR检测METTL3在MEG-01中的表达水平.流式细胞术检测巨核细胞表面分化成熟标志物CD41a和CD61的表达水平.转录组测序筛选METTL3的下游靶标分子,并通过RT-qPCR和WB检测其表达水平.继而,在过表达METTL3的细胞中,采用RT-qPCR和WB检测METTL3表达水平,流式检测CD41a、CD61.另外,在敲低METTL3的MEG01细胞中过表达METTL3,采用RT-qPCR和WB检测METTL3表达水平,流式检测CD41a、CD61.最后,生物信息学预测ITGB3 mRNA上的m6A结合位点.m6A-RIP联合Me-PCR实验检测m6A富集信号.结果 METTL3在MEG-01中mRNA及蛋白水平均有表达;成功构建METTL3敲低的MEG-01细胞系,METTL3 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P＜0.001);shMETTL3组MEG-01细胞表面巨核细胞分化成熟标志物CD41与CD61的表达水平较对照组显著下降(P＜0.001);转录组测序分析显示靶分子为ITGB3(CD61编码基因),RT-qPCR与WB证实,shMETTL3组中ITGB3 mRNA及蛋白表达量显著降低(P＜0.05);METTL3过表达组CD41a和CD61显著上调;METTL3敲低后回补组CD41a和CD61显著恢复(P＜0.01);生物信息学预测及m6A-RIP联合Me-PCR实验证实:(1)ITGB3 mRNA的m6A富集程度显著高于对照GAPDH mRNA(P＜0.001);(2)shMETTL3组ITGB3 mRNA的m6A甲基化修饰水平明显降低(P＜0.001).结论 RNA甲基转移酶METTL3的下调导致ITGB3 mRNA的m6A甲基化修饰水平降低,进而抑制ITGB3表达,最终抑制巨核细胞分化成熟及血小板生成进程.