换一批hTERT在人诱导多能干细胞体外分化为巨核细胞中的作用
Role of hTERT in the Differentiation of Human iPSCs into Megakaryocytes in vitro
摘要目的 建立多西环素(Dox)诱导人端粒酶逆转录酶(hTERT)稳定过表达的人诱导多能干细胞(iPSCs),探讨hTERT对iPSCs向巨核细胞(MK)分化及巨核细胞增殖能力的影响.方法 将Dox诱导型hTERT双载体转染人iPSCs,通过嘌呤霉素筛选和单克隆扩增获得稳定细胞系后,利用荧光显微镜、RT-qPCR及Western blot验证hTERT过表达水平.采用Spin-EB方法体外培养人iPSCs诱导分化生成巨核细胞,利用流式细胞术、细胞计数和显微观察评估hTERT-iPSCs的分化效率及增殖能力,通过透射电镜、瑞氏-吉姆萨染色及免疫荧光等方法检测生成巨核细胞的成熟度、形态与功能.结果 成功建立Dox诱导型hTERT-iPSCs稳定株,iPSCs体外培养添加Dox诱导后,hTERT-iPSCs细胞的GFP阳性率、hTERT mRNA(P＜0.05)及蛋白表达显著上调.hTERT-iPSCs体外培养分化的细胞可持续培养至35天,但GFP阳性率呈时间依赖性下降.将Dox诱导时间提前至体外培养分化第8天可显著促进细胞增殖(P＜0.001),并维持hTERT表达(P＜0.01).形态学和功能评估显示,hTERT-iPSCs生成的巨核细胞的大小、典型细胞器及血小板样颗粒释放无显著差异.结论 hTERT促进iPSCs体外培养巨核系分化,于分化第8天启动Dox诱导可有效促进iPSCs来源巨核细胞的长期增殖,同时维持其成熟的形态学特征和功能.该策略为体外大规模制备巨核细胞及血小板提供了有效途径.
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关键词
人端粒酶逆转录酶诱导多能干细胞巨核细胞分化四环素调控系统多西环素慢病毒Human telomerase reverse transcriptaseInduced pluripotent stem cellsMegakaryocyte differentiationTetracycline-inducible systemDoxycyclineLentivirus
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-2587.2025.05.004
发布时间
2025-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（No.81970165）
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