换一批抗人Kv1.5胞外环肽段E215抗体的制备与鉴定
Preparation and verification of antibodies against the peptide fragment E215 from the extracellular loop of human Kv1.5
摘要目的:为研究新的人Kv1.5(hKv1.5)通道/超快激活延迟整流钾通道(Ikur)阻滞剂,通过免疫法制备抗hKv1.5胞外环肽段E215的特异性抗体,并进行鉴定.方法:雄性新西兰大白兔,随机分为免疫组和假性免疫组.从hKv1.5胞外环中筛选出一段短肽E215作为抗原肽免疫动物.免疫组予抗原免疫,2周1次,假性免疫组予0.9%氯化钠溶液免疫,方法同前.实验63 d处死,留取血清,亲合层析法提取、纯化抗肽段E215抗体.酶联免疫吸附法(ELISA)动态地观察抗体在体内的产生及效价,免疫荧光组织化学及免疫印迹(Western-blot)观察制备的抗体与人心房肌细胞膜及hKv1.5/Ikur通道蛋白的结合.结果:ELISA结果表明,免疫组于实验第28、42、56、63 d血清抗体滴度分别达到1:6 400、1:6 400、1:6 400、1:12 800;免疫荧光组织化学显示,制备的抗体能结合于人心房肌细胞的细胞膜;Western-blot结果表明,此抗体能特异性结合人心房肌细胞膜上分子量为75 000的蛋白(hKv1.5/Ikur通道蛋白).而假性免疫组未发现相同抗体产生.结论:所制备胞外环肽段E215的抗体能与人心房肌细胞膜上hKv1.5/Ikur通道特异性结合,为下一步实验提供了新的药理学干预手段.
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