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组织样本保存状态及时间对EGFR基因突变检测结果的影响

Influences of storage status and time on the mutations of EGFR gene

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摘要目的：探讨不同组织保存状态（原始样本或基因组DNA）及保存时间对非小细胞肺癌（ NSCLC）中表皮生长因子受体（ EGFR）基因突变检测结果的影响。方法收集 EGFR基因突变阳性 NSCLC患者的新鲜冰冻组织和石蜡包埋（FFPE）组织各例，每保存个月提取次DNA（共次），设为冰冻新提取组和FFPE新提取组；同时分别选取初检后剩余基因组DNA作对照，设为冰冻预留组和FFPE预留组。分别采用检测试剂盒定性和定量检测上述组EGFR基因的突变情况，同时采用荧光定量PCR技术检测内参基因的Ct值。比较组不同保存时间的内参基因Ct值和EGFR基因突变频度情况。结果例原始组织样本均可以检出EGFR基因突变，与临床信息相符。新鲜冰冻组织、FFPE组织的DNA浓度均＞50ng/μl，且A260/A280为.8±0.2。新鲜冰冻组织保存个月后，冰冻预留组的内参基因Ct值高于冰冻新提取组，差异有统计学意义（ P＜0.05）；FFPE保存个月内，FFPE新提取组和FFPE预留组内参基因Ct值的差异均无统计学意义（ P＞0.05）。冰冻新提取组保存个月后和FFPE新提取组保存个月后的EGFR基因突变频度高于对应预留组，差异均有统计学意义（ P＜0.05）。结论原始样本相对于预留基因组DNA更适合用于回顾性研究的材料。