微小RNA-149靶向调控FOXM1的表达及其对非小细胞肺癌细胞A549增殖和凋亡的影响

Effects of miRNA-149 on the targeted regulation of FOXM1 and proliferation and apoptosis of non-small cell lung cancer cell line A549

二维码有效期 120s

摘要目的探讨微小RNA-149(miR-149)在非小细胞肺癌(NSCLC)中调控细胞增殖和凋亡的相关机制.方法采用Lipofectamine脂质体法将miR-149模拟物(mimics)及其对照载体转染至A549细胞并分为miR-149转染组和miR-149对照组,同时以未转染的A549细胞作对照(未转染组).采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组miR-149水平以评价转染的效果,采用MTT法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测转染后各组细胞增殖和凋亡情况.QPCR检测各组FOXM1基因的表达情况,Western blotting检测FOXM1蛋白的表达情况.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-149与FOXM1之间靶向作用关系.结果 QPCR检测转染48h后miR-149转染组的miR-149相对表达量为2.493-±0.380,高于未转染组的1.077±0.321和miR-149对照组的1.283±0.273,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染24、48、72 h的增殖抑制率分别为(16.51±2.49)％、(22.90±3.65)％和(31.43±5.27)％,均高于其余两组,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染48 h的凋亡率为(29.17±4.48)％,高于未转染组的(5.34±1.72)％和miR-149对照组的(7.62±1.59)％,差异均有统计学意义(P＜0.05);miR-149转染组转染48 h后的FOXM1 mRNA和蛋白水平分别为0.624±0.102和0.349±0.065,均低于未转染组的0.976±0.076和0.654±0.074及miR-149对照组的0.920±0.117和0.718±0.077,差异均有统计学意义(P＜0.05);双荧光素酶报告基因实验表明miR-149可显著抑制野生型FOXM1-3'UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响.结论 miR-149可能是通过靶向FOXM1调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,可作为NSCLC分子治疗的有效靶点.