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超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法检测牡丹根皮中抗氧化活性成分及其抗氧化能力

Detection of Antioxidant Active Components and Their Antioxidant Ability from Moutan Cortex by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry

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摘要为能准确检测复杂基质牡丹根皮样品中的抗氧化活性成分及其抗氧化能力,进行了题示研究,并推测了1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除过程的反应机理.采用70%(体积分数,下同)乙醇溶液超声提取样品2次,过滤后合并滤液,浓缩、离心、稀释,配制成200 g·L-1样品溶液,并进一步稀释成质量浓度为8,40,100,200,500,1 000,5 000,10 000,25 000 mg·L-1的样品溶液系列.取上述配制好的样品溶液系列各300 μL(不添加样品的为样品对照组)和无水乙醇600 μL,再加入50 mg·L-1 DPPH溶液600 μL,涡旋1 min,避光反应30 min.用70%乙醇溶液稀释200倍,过0.22 μm滤膜,采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UHPLC-Q-TOF-MS)测量样品加入前后DPPH准分子离子峰面积P0和P,利用100%×(P0-P)/P0计算DPPH自由基清除率.结合自身谱库、标准品谱图以及牡丹根皮相关文献鉴定各抗氧化活性成分.结果显示:样品的质量浓度在8～1 000 mg·L-1内与DPPH自由基清除率呈线性关系,较酶标仪法受样品基质和颜色干扰小,且DPPH自由基清除率结果和酶标仪法的基本一致;从牡丹根皮中显著识别出18种抗氧化活性成分,包括15种可鉴定成分(包含两对同分异构体)和3种未知成分,其中氧化芍药苷、丹皮酚、牡丹皮苷H、没食子酰芍药苷、没食子酸甲酯、牡丹皮苷F、对羟基苯甲酸是牡丹根皮中主要的抗氧化活性成分.