人重组蛋白DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力作用

Recombinant human DKK1 protein in oral squamous cell carcinoma stem cell migration and invasion role

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摘要目的探讨DKK1通过靶基因调节Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力的作用.方法培养并鉴定口腔鳞癌干细胞,并将细胞分为3组,分别为空白对照组(A组),未转染siRNA;阴性对照组(B组),转染StealthTM RNAi的阴性对照;DKK1 RNAi组(C组),转染DKK1 StealthTMSelect RNAi.利用实时定量PCR(RT-PCR)检测3组的转染效率及口腔鳞癌干细胞中Wnt3a、Pitx2、Oct4 mRNA的表达情况.运用划痕实验和Transwell侵袭实验检测DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移和侵袭的影响.结果流式细胞仪检测CD44及CD133表达量分别为88.0%及92.8%,提示所培养细胞为口腔鳞癌干细胞.瞬时转染后,应用RT-PCR检测提示,C组Wnt3a、Pitx2及Oct4 mRNA表达量较A组分别下降59.8%、70.7%和66.0%(P<0.05).细胞划痕实验结果显示,A、B、C组24 h的划痕愈合率分别为(54.32%±3.21%)、(49.46%±3.75%)和(14.13%±1.96%),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell实验结果显示,A、B、C组中穿透细胞膜的细胞数目分别为(115.6 ±14.3)个、(131.2 ±19.5)个和(37.3 ±6.8)个,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DKK1可以通过抑制Wnt3a,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制口腔鳞癌的转移及侵袭.