巨核细胞/血小板E1A激活基因阻遏子基因敲除小鼠构建及胎肝巨核细胞诱导分化

Construction of megakaryocyte/platelet Creg1 knockout mice and induced differentiation of megakaryocytes from fetal liver

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摘要目的构建巨核细胞/血小板特异性E1A激活基因阻遏子基因(Creg1)敲除小鼠,并诱导小鼠胚胎胎肝巨核细胞的分化,为研究Creg1 在巨核细胞分化和血小板生理功能中的作用提供实验工具及方法.方法将雌性Creg1flox/flox小鼠与雄性血小板因子4(Pf4)-Cre+小鼠繁育,获得Creg1flox/wt Pf4-Cre+小鼠,进一步交配获得巨核细胞/血小板特异性Creg1 敲除小鼠(Creg1flox/flox Pf4-Cre+,简写为Creg1-/-).采用聚合酶链式反应及琼脂糖凝胶电泳进行基因型鉴定.取Creg1flox/flox和Creg1-/-孕龄约15d小鼠的胎肝,体外培养胎肝细胞 4d,加入血小板生成素,光镜下观察两组巨核细胞形态和大小的区别.结果本研究成功构建了Creg1-/-小鼠.与Creg1flox/flox小鼠比较,Creg1-/-小鼠巨核细胞中Creg1 mRNA的表达量显著下降,差异有统计学意义(P<0.05).与Creg1flox/flox小鼠比较,Creg1-/-小鼠胎肝巨核细胞诱导分化4d时,光镜下观察发现,巨核细胞的直径明显变小,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Creg1-/-小鼠作为研究巨核细胞和血小板相关疾病发生机制的实验工具鼠,可能揭示尚未发现和阐明的重要病理生理学机制,为临床治疗血小板疾病提供理论基础支持.