视神经萎缩蛋白-1对BV2小胶质细胞炎症激活影响
Effect of optic atrophy-1 on inflammatory activation of BV2 microglial cells
摘要目的 探讨视神经萎缩蛋白-1(OPA1)对BV2 小胶质细胞炎症激活的影响.方法 取对数生长期的BV2 细胞进行实验.第一部分将BV2 细胞分为 Control组(加入等体积 PBS缓冲液)、si-NC组(用空白质粒进行转染)、si-OPA1 组(用OPA1 沉默质粒转染).第二部分将BV2 细胞分为对照组(加入等体积PBS缓冲液)、脂多糖组(加入浓度为100 ng/ml的脂多糖)、空载体组(用空白载体转染后用脂多糖处理)、OPA1 过表达组[用OPA1-pcDNA3.1(+)转染后用脂多糖处理].采用定量聚合酶链反应检测OPA1 mRNA表达水平,采用Western-blot检测OPA1 蛋白表达水平及酸性溶霉菌糖蛋白(CD68)表达水平,采用免疫荧光法检测BV2 细胞炎症激活标志物离子钙结合适配器分子 1(IBA1)水平,采用酶联免疫吸附实验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 表达水平.结果 si-OPA1 组 OPA1 mRNA 及蛋白表达水平均低于Control组及si-NC组,IBA1 平均荧光强度、CD68 蛋白表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均高于Control组及si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05).脂多糖组OPA1 mRNA及蛋白表达水平低于对照组,IBA1 平均荧光强度、CD68 蛋白表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).OPA1 过表达组OPA1 mRNA及蛋白表达水平高于空载体组,IBA1 平均荧光强度、CD68 蛋白表达水平及TNF-α、IL-1β、IL-6 水平均低于空载体组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 沉默OPA1 可引起 BV2 细胞炎症激活,过表达OPA1 可逆转脂多糖造成的BV2 细胞炎症激活.
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