奶牛子宫内膜原代上皮细胞转染miRNA模拟物效率的研究

Research to transfection effect of miRNA mimics in uterine epithelial primary cells of dairy cows

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摘要研究旨在提高miRNA模拟物在奶牛子宫内膜原代上皮细胞的转染效率.应用带有FAM标记的miRNA-185 mimics为报告基因,检测两种不同转染试剂(Lipofectamine RNAiMAX与Lipofectamine 2000)在细胞接种12、18、24 h后的转染效率,采用Q-PCR法检测最佳转染条件下试验组与对照组miRNA-185的表达变化.结果显示,无论使用Lipofectamine 2000还是Lipofectamine RNAiMAX作为奶牛子宫内膜原代上皮细胞的转染试剂,各组间12 h的转染效率均极显著高于18、24 h(P＜0.01),18 h的转染效率均极显著高于24 h(P＜0.01);Lipofectamine RNAiMAX 各时间点的转染效率均极显著高于 Lipofectamine 2000(P＜0.01).使用 Lipofectamine RNAiMAX作为奶牛子宫内膜原代上皮细胞的转染试剂时,12h的荧光强度极显著高于18、24 h(P＜0.01),24 h的荧光强度极显著高于18 h(P＜0.01),Lipofectamine RNAiMAX各时间点的荧光强度均极显著高于Lipofectamine 2000(P＜0.01).检测Lipofectamine RNAiMAX在细胞接种12 h转染后miRNA-185表达量,发现与对照组相比,试验组miRNA-185的表达极显著升高(P＜0.01).研究表明,奶牛子宫内膜原代上皮细胞适合应用脂质体进行miRNA化学合成模拟物的转染,当选用Lipofectamine RNAiMAX作转染试剂,细胞接种12 h后转染可达最佳的转染效果.