换一批利用CRISPR/Cas9技术构建G3BP2基因缺失型BHK21细胞系
Construction of BHK21 cell line with G3BP2 gene deletion by CRISPR/Cas9 technology
摘要试验采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建G3BP2基因敲除的稳定乳仓鼠肾细胞(BHK21)系,并探究其对抗应激能力的影响.将构建的两组PX459-G3BP2-sgRNA重组质粒共转染BHK21细胞,使用嘌呤霉素筛选单克隆细胞株进行连续传代,在传代培养至十代后提取蛋白进行蛋白质印迹技术(WB)检测,将敲除稳定性较好的细胞株提取DNA进行PCR扩增及测序.随后将二硫苏糖醇(DTT)溶液加入构建的G3BP2-/-细胞株和野生型细胞株中进行细胞形态观察,测试G3BP2-/-细胞株对热应激的反应.结果显示,试验得到3株G3BP2稳定表达阴性的细胞株:C8、E10、F9.镜检结果显示,缺失G3BP2基因的BHK21细胞的形态比野生型BHK21细胞的细胞形态更易受到影响.研究表明,试验成功获得了稳定的G3BP2-/-细胞系,并验证了其生物学功能,为后续深入研究G3BP2基因在BHK21细胞中其他作用与机制奠定基础.
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