换一批
换一批马疱疹病毒1型ORF2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
Prokaryotic expression of equine herpesvirus type 1 ORF2 protein and preparation of its polyclonal antibodies
摘要研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体.根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)感受态细胞,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达ORF2蛋白,使用Ni-NTA琼脂糖纯化树脂纯化,免疫BALB/c小鼠,检测多克隆抗体的效价和特异性.结果显示:ORF2基因成功克隆至原核表达载体pET-28a中,并通过大肠杆菌表达系统得到ORF2蛋白,大小约为38 ku,以包涵体的形式存在.通过Ni-NTA纯化树脂获得纯度较高的重组蛋白,能够与EHV-1阳性血清特异性结合;间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价为1:64 000,RK-13表达的ORF2蛋白可被多克隆抗体能特异性识别.研究表明,大肠杆菌表达的ORF2重组蛋白具有良好反应原性,ORF2蛋白制备的多克隆抗体效价高、特异性强,可为ORF2蛋白的生物学功能和基因缺失疫苗的研究奠定基础.
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关键词
马疱疹病毒1型ORF2蛋白原核表达多克隆抗体制备Equine herpesvirus type 1ORF2 proteinProkaryotic expressionPreparation of polyclonal antibody
分类号
S855.3
栏目名称
试验研究
DOI
10.20154/j.cnki.issn1672-9692.2024.06.001
发布时间
2024-08-08
基金项目
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