沉默NOX4对百草枯诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化应激和凋亡的影响
NOX4 silence regulates oxidative stress and cell apoptosis in pulmonary alveolar type Ⅱ epithelial cells exposure to paraquat
摘要目的 通过siRNA沉默人肺泡Ⅱ型上皮样A549细胞中NOX4基因,探讨NOX4在百草枯诱导肺泡上皮细胞凋亡中的作用.方法 根据GeneBank中NOX4全长cDNA序列,选取特异性序列为干扰作用的靶点,构建NOX4 siRNA表达载体,脂质体介导转染A549细胞,筛选出最佳干扰siRNA.实验设置正常对照组、PQ组、PQ+转染组及转染对照组.正常对照组仅给予培养基处理24 h,PQ组加入百草枯(700μM)处理24 h,PQ+转染组给予NOX4 siRNA转染细胞48 h后,用含百草枯(700μM)的DMEM培养液培养24 h,转染对照组仅加入NOX4 siRNA.结果 与正常对照组相比,PQ组A549细胞活力下降,细胞凋亡率显著升高,NOX4表达明显增加,MDA含量显著增加,ROS水平明显升高;与正常对照组相比,转染对照组仅见NOX4表达显著降低;而与PQ组相比,PQ+转染组细胞活力上升,细胞凋亡率显著减低,NOX4表达明显降低,MDA含量显著减少,ROS水平亦显著下降.结论 降低NOX4表达可抑制PQ诱导的A549细胞氧化应激和凋亡.这一结果可能为肺纤维化提供了新的治疗靶点.
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