siRNA介导的GDF11沉默对人脐静脉内皮细胞衰老的影响

Effect of siRNA-mediated GDF11 Silencing on the Senescence of Human Umbilical Vein Endothelial Cells

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摘要目的基于细胞周期机制探索生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF11)与细胞衰老的关系.方法应用D-半乳糖构建人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老模型,应用siRNA构建GDF11低表达模型,观察GDF 11对HUVEC的β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase,SA-β-Gal)的活性及周期相关P300、C-myc和TGFβ表达的影响.实验分组与处理:(1)对照组:HUVEC不作处理;(2)模型组:用10 g/L的D-半乳糖成功构建HUVEC衰老模型;(3)siRNA-NC组:siRNA的内部对照组不干预GDF11表达,转染24h后再应用D-半乳糖诱导24 h后进行指标检测;(4) siRNA组:与siRNA-NC组步骤相同但可降低GDF 11的表达;(5) GDF11前处理组:先用GDF11处理24 h后再用D-半乳糖诱导24 h;(6) GDF11后处理组:先应用D-半乳糖诱导24 h后再用GDF 11处理24 h.结果 10 g/L D-半乳糖可成功诱导HUVEC细胞衰老模型;10 ng/μLGDF11可促进P300和C-myc表达;GDF11可减少衰老相关SA-β-Gal的表达;GDF11可能经P300/C-myc通路干预细胞周期进而干预细胞衰老进程;GDF11处理后可明显降低SA-β-Gal活性,且GDF11前处理,细胞抵抗D-半乳糖诱导衰老的能力越好.结论外源性GDF11参与调节HUVEC细胞周期并延缓细胞衰老.