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补阳还五汤促进自噬抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞衰老机制研究

Mechanism Research of Buyang Huanwu Decoction(补阳还五汤)on Promoting Autophagy and Inhibiting Aging of Human Umbilical Vein Endothelial Cells Induced by H2O2

摘要目的 观察补阳还五汤(BYHW)对过氧化氢(H2O2)诱导的衰老内皮细胞沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)-自噬通路的作用.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,H2O2诱导的内皮细胞作为模型,体外培养HUVECs,并将细胞分为正常组、模型组(H2O2 400 μmol/L)、BYHW组(H2O2400 μmol/L+BYHW 2500 μg/mL).衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老,蛋白质免疫印迹法检测SIRT1、纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)、泛素结合蛋白p62及微管相关蛋白1轻链3β(LC3)蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,免疫荧光观察SIRT1、LC3的表达.结果 400 μmol/L的H2O2处理可成功诱导HUVECs衰老.与正常组相比,衰老模型组中SA-β-Gal阳染率增加,SIRT1、LC3蛋白表达降低,SOD含量降低,PAI-1、p62蛋白表达升高,MDA含量升高,细胞免疫荧光显示SIRT1、LC3表达降低.与模型组比较,BYHW组细胞蓝染比率降低,PAI-1、p62蛋白表达降低,SOD水平升高,SIRT1、LC3蛋白表达升高,细胞免疫荧光BYHW组SIRT1、LC3表达明显升高.结论 在过氧化氢诱导的HUVECs衰老模型中,补阳还五汤能够上调SIRT1,激活自噬,从而对衰老的内皮细胞起到保护作用.

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