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滋肾育胎丸对多囊卵巢综合征早期流产的调控及其机制

Regulation and Mechanism of Zishen Yutai Pill(滋肾育胎丸)on Early Abortion with Polycystic Ovary Syndrome

摘要目的 观察滋肾育胎丸对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠早期流产的调控及调控机制.方法 将27只雌性妊娠SD大鼠随机分为对照组、模型组及滋肾育胎丸组,每组9只.给药方式:对照组使用等体积0.9%氯化钠溶液和大豆油腹股沟皮下注射,并使用等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续7 d;PCOS模型组使用双氢睾酮1.66 mg·kg-1·d-1(日1次)和胰岛素注射液6 IU/d(早晚各3 IU)腹股沟皮下注射,并使用等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续7 d;滋肾育胎丸治疗组使用双氢睾酮1.66 mg·kg-1·d-1(日1次)和胰岛素注射液6 IU/d(早晚各3 IU)腹股沟皮下注射,滋肾育胎丸1.5 mg·kg-1·d-1(日1次)于0.9%氯化钠溶液溶解灌胃,连续7 d.实验步骤:记录每日体质量变化,在妊娠第7日行口服葡萄糖耐量试验;妊娠第8日晨取材,评估胚胎着床情况,记录胚胎着床数量、血胚(棕褐色)数量;获取血清、子宫、卵巢组织,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、性激素结合球蛋白(SHBG)和空腹胰岛素(FINS)水平;计算游离雄激素指数(FAI)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和葡萄糖曲线下面积(AUC);通过苏木精和伊红染色观察子宫的形态;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测子宫葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、同源框A10(HOXA10)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(WB)测定大鼠子宫中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路关键分子的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,模型组大鼠胚胎着床数量降低,血胚数量明显增多,卵巢和子宫重量减轻,子宫内膜结构改变;血清T、FINS、FAI、HOMA-IR和AUC升高,E2和SHBG降低(P<0.05),糖耐量和胰岛素敏感性降低;大鼠子宫组织中IL-6、TNF-α mRNA表达水平均升高,p-PI3K和p-Akt表达水平明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,滋肾育胎丸组胚胎着床数量增加,血胚数量减少,子宫重量增加,子宫内膜结构恢复正常;血清FAI、HOMA-IR和AUC明显降低,E2和SHBG显著增高(P<0.05),糖代谢和胰岛素敏感性增强;大鼠子宫组织中 IL-6、TNF-α mRNA表达水平均降低,p-PI3K和p-Akt表达水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 滋肾育胎丸治疗可降低PCOS大鼠早期流产率,提高胚胎着床数量,其机制可能与调节血清激素水平,改善子宫内膜结构和功能,调控PI3K/Akt信号通路关键分子表达和抑制炎症因子表达水平有关.

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