芪石升降归元颗粒对胃食管反流病大鼠的干预作用及可能作用机制
Mechanism of Qishi Shengjiang Guiyuan Granule(芪石升降归元颗粒)on GERD Rats Based on Bel-2/CytC/Caspase3 Pathway Mediating Esophageal Cell Apoptosis
摘要目的 分析芪石升降归元颗粒对胃食管反流病(gastroesophageal reflax disease,GERD)大鼠的干预作用,并基于B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)/细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)/Caspase3通路探讨其作用机制.方法 将42只SPF雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、西药组、中药组.除假手术组10只外,其余各组均采用食管支架植入术制作GERD大鼠模型.造模成功后,西药组予以枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片灌胃,中药组给予芪石升降归元颗粒灌胃,疗程均为14 d.干预结束后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠食管下段组织形态学变化;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中Bcl-2、Caspase3及Cyt C的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR)检测食管组织内 Bcl-2 mRNA、Caspase3 mRNA、Cyt C mRNA 表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测食管组织内 Bcl-2、Caspase3、Cyt C蛋白表达水平.结果 GERD模型大鼠精神状态差,活动及进食量减少,光镜下观察可见细胞排列紊乱,鳞状上皮增生,固有层乳头延伸,上皮细胞炎性浸润.经西药及芪石升降归元颗粒治疗后,大鼠精神状态佳,进食量及活动正常,光镜下观察可见细胞排列规整,鳞状上皮增生好转,无固有层乳头延伸,未见明显炎症细胞浸润.与假手术组比较,模型组食管组织中的Cyt C mRNA、Caspase3 mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);模型组血清Bcl-2表达量降低(P<0.001),Cyt C和Caspase3表达量升高(P<0.001,P<0.01).与模型组比较,西药组食管组织中的Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05),Caspase3 mRNA表达量降低(P<0.05);血清中Cyt C的浓度降低(P<0.001).与模型组比较,中药组食管组织Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.001),Cyt C mRNA和Caspase3 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.001);血清Bcl-2浓度升高(P<0.001),Cyt C和Caspase3浓度降低(P<0.05,P<0.001).与西药组比较,中药组食管组织Bcl-2、Cyt C和Caspase3蛋白表达水平降低(P<0.001),Cyt C和Caspase3 mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.001).结论 芪石升降归元颗粒均可调控Bcl-2/Cyt C/Caspase3通路,抑制食管细胞凋亡,进而调节组织脏腑功能而有效干预GERD,且芪石升降归元颗粒效果优于枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片.
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