基于ASS1介导的Src/STAT3、MAPK/ERK级联反应探究参七虫草方对IPF模型大鼠成纤维细胞的影响
Probing Effects of Shenqi Chongcao Formula(参七虫草方)on Rat Fibroblasts in IPF Model Based on ASS1-mediated Src/STAT3 and MAPK/ERK Cascade Reaction
摘要目的 探究参七虫草方对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)模型大鼠成纤维细胞的影响.方法 除空白组外均采用气管内滴注BLM的方法体外分离培养模型成纤维细胞.CCK-8法检测肺成纤维细胞增殖情况,选取最佳浓度及时间进行后续实验.实验分为6组:正常成纤维细胞+正常含药血清组(A组)、模型成纤维细胞+正常含药血清组(B组)、参七虫草方最佳含药血清组(C组)、精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(arginine succinate synthetase-1,ASS 1)抑制剂组(D组)、酪氨酸激酶(tyrosine kinase,Src)/信号转导和转化激活因子3(signal transducer and transformation activator 3,STAT3)阻断剂组(E 组)、MAPK/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regula-tory protein kinase,ERK)通路抑制剂组(F组).采用CCK-8法、细胞划痕实验分别检测细胞活力和迁移速率;RT-qPCR 检测 ASS1、Src、STAT3、双特异性蛋白激酶 1/2(bispecific protein kinase 1/2,MEK1/2)、ERK1/2 基因表达水平;Western Blot(WB)检测各组 p-ERK、激活蛋白-1(activator-1,AP-1)、P-MEK、基质金属蛋白酶(matrix metalloprotei-nases,MMPs)、核蛋白因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平.结果 与A组比较,B组的细胞活力及细胞迁移速率增强和增快(P<0.05);与B组比较,其余干预组的细胞活力及细胞迁移速率减弱及降低(P<0.05).RT-qPCR检测结果:B组与A组比较,ASS1、MEK1、MEK2、ERK1、ERK2、Src、STAT3基因表达水平升高(P<0.05).与B组比较,其余干预组有关基因表达水平降低(P<0.05).WB检测结果显示:B组与A组比较,p-ERK、P-MEK、MMP-2、MMP-9、NF-κBp65、AP-1蛋白表达水平升高(P<0.05).与B组比较,其余干预组表达水平降低(P<0.05).结论 参七虫草方能够抑制ASS1介导的Src/STAT3、MAPK/ERK级联反应,下调MMP-2、MMP-9、AP-1、NF-κBp65蛋白表达,改善IPF病情进展.
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