调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌叠氮溴化丙锭-实时荧光定量PCR检测方法的建立
Establishment of a Propidium Monoazide-Fluorescent qPCR Method for Detecting Yersinia enterocolitica in Prepared Meat Products
摘要为缩短检测周期,排除死菌DNA的干扰,采用实时荧光定量PCR对调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行检测.方法:采用叠氮溴化丙锭(Propidium Monoazide,PMA)鉴别死活菌,检测目标菌中的特异性基因片段,构建利用PMA预处理结合实时荧光定量PCR的特异性检测方案.结果:在PMA工作浓度为40 μg·mL-1、暗孵育时间为 10 min、曝光时间为 20 min的最佳方案下处理,可在不影响目标活菌正常扩增的同时抑制死菌的干扰.本方法快速准确,检验周期可缩短到 48 h,在 1.2×103 CFU·mL-1 菌量下仍能有效检出目标菌.结论:本方法特异性强、灵敏度高,适用于突发事件中检测调理肉制品中的小肠结肠炎耶尔森氏菌.
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