利用 PMI 选择标记进行杨树转基因体系的研究

Poplar Transgenic System by Using PMI as Biosafety Selective Marker

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摘要[目的]利用不同于抗生素的 PMI 为选择标记基因的遗传转化体系，对杨树进行双抗虫基因（Bt 和 CpTI）的转基因研究。建立杨树以 PMI 为安全标记基因的转基因体系，为安全、高效的林木转基因育种研究提供实验依据。[方法]选择已有的转 CpTI 抗虫基因（利用 Kmr 选择标记获得）的美洲黑杨杂种优良无性系南林895杨（Populus × euramericana ‘Nanlin895’）为受体材料，对杨树叶片、叶片分化芽、茎段生根的甘露糖敏感性等筛选优化，采用农杆菌介导的方法进行双抗虫基因的研究。[结果]较为适合的杨树叶片筛选培养基为：甘露糖8 g·L －1和蔗糖22 g· L －1；叶片分化芽筛选培养基为：甘露糖10 g·L －1和蔗糖20 g·L －1；茎段生根筛选培养基：甘露糖8 g·L －1和蔗糖22 g·L －1。在此基础上，获得了转 Bt 和 CpTI 双抗虫基因的植株8株。[结论]初步建立了以 PMI 为安全标记基因的杨树转基因体系：确定了 PMI 筛选的最适选择压，成功构建了含 PMI 选择标记基因的植物抗虫表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化最终获得了转双抗虫基因植株。