换一批
换一批一种用于PCR的丝状真菌DNA快速粗提方法
A Rapid Alkaline Extraction Method for the Isolation of Crude Genomic DNA from Filamentous Fungi for PCR
摘要为了在实验室条件下更加快速、经济、安全、高效地提取丝状真菌DNA,研究出了一种利用NaOH碱裂解快速提取DNA的方法,主要包括以下步骤:利用液氮快速粉碎样品;采用碱裂解(NaOH)的方式一步提取DNA;以TE缓冲液中和;以中和后的DNA作为模板进行基因克隆及PCR分析.通过比较不同的NaOH浓度提取尖孢镰刀菌DNA质量,确定最适NaOH浓度为0.5 mol/L.试验用此方法提取了丝状真菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxys-porum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、链格孢(Alternaria alternata)及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的基因组并用于基因克隆.同时,利用该方法提取的DNA质量可满足尖孢镰刀菌转化子的快速PCR鉴定需求.综上所述,与利用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)提取DNA相比,利用NaOH碱裂解法,可以更加快速提取丝状真菌的DNA,操作步骤简单,节约时间,无须使用氯仿、异丙醇等有毒物质,而且提取的丝状真菌DNA完整性较好,质量可观,可用于基因克隆及转化子筛选鉴定,具有一定的利用价值和推广前景.
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