换一批基于磁性层状双氢氧化物和核酸外切酶Ⅰ的新型大肠杆菌荧光传感器构建
A novel fluorescent sensor for Escherichia coli detection based on magnetic layered double hydroxide and exonuclease Ⅰ
摘要目的 基于磁性层状双氢氧化物(magnetic layered double hydroxide,MLDH)对修饰在单链和双链DNA上的羧基荧光素(6-car-boxyfluorescein,FAM)的高效淬灭,以及核酸外切酶Ⅰ(exonucleaseⅠ,ExoⅠ)对单链DNA的选择性降解作用,建立测定大肠杆菌的荧光传感器.方法 将不同浓度的大肠杆菌特征DNA与FAM标记的互补DNA探针杂交,形成FAM-双链DNA,加入Exo I选择性降解剩余探针,再加入MLDH吸附并淬灭FAM-双链DNA.通过磁铁分离上清液与MLDH,测量上清液的荧光强度.结果 在最优实验条件下,本法检测大肠杆菌特征DNA的线性范围为 0.05～30 nmol/L,相关系数(R2)为0.997,检测限(3σ)为 0.025 nmol/L,对江水、自来水和茶饮料中大肠杆菌DNA的回收率为 85.4%～118%,相对标准偏差小于 5%.结论 利用MLDH的荧光淬灭能力和Exo I对单链DNA的选择性水解能力成功构建了测定大肠杆菌的新型荧光传感器,与传统大肠杆菌检测法相比,所建新型传感器灵敏度高、选择性好、准确度高,能实现对大肠杆菌的快速检测.
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关键词
磁性层状双氢氧化物核酸外切酶Ⅰ荧光传感器大肠杆菌DNA检测Magnetic layered double hydroxideExonuclease ⅠFluorescent sensorEscherichia coliDNA detection
分类号
R115（卫生基础科学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2096-3351.2024.05.004
发布时间
2024-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
四川省自然科学基金项目（2022NSFSC1490）
泸州市科技计划项目（2021-JYJ-72）
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