换一批抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达
Soluble expression in Escherichia coli of functional ScFv of monoclonal antibody MC5 against human colorectal carcinoma
摘要目的制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段(ScFv).方法从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因(VH和VL DNA),经linker DNA连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后,获得重组噬菌体.以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行 2轮筛选后,经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆.取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用于表达可溶性ScFv.经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性.结竦玫腣H、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.对重组噬菌体经2轮亲和筛选后,经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆.源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32 000 u,且浓集于细菌周质腔中,可溶性ScFv具有抗原结合活性,其结合位点与亲本单抗MC5相同.结论针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备,为人结肠癌的体外(乃至体内)研究提供了新的靶向载体分子.
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分类号
R735.303（消化系肿瘤）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1000-8861.2003.01.001
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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